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行業資訊

灌流技術助力慢病毒載體的放大生產


慢病毒載體(LV)是基因和細胞治療應用的關鍵工具。如何為臨床應用提供足夠數量且穩定合規的載體一直是備受關注的重點和難點。慢病毒載體通常是通過多質粒瞬時轉染HEK 293貼壁細胞株而產生,常規方法屬于實驗室密集型,需依賴質粒的供應。貼壁培養需通過增加細胞附著和生長的可用面積來放大。但由于瞬時轉染中過量的質粒和轉染試劑的殘留,會引起終產物的污染。因此,穩定且規?;穆《駒靨逕侍餿勻回醬餼?。目前一些學術和工業實驗室正在開發懸浮培養工藝,希望最終實現在傳統的攪拌罐中完成慢病毒載體的生產。


       在剛剛結束的2018年中國生物制品年會上,來自中國食品藥品檢定研究院的孟淑芳主任在比較國內外CAR-T細胞治療產品質量控制要求中,再次重申了質粒及病毒載體生產及質量控制問題,這也同今年6月份藥檢所頒布的《CAR-T細胞治療產品質量檢測研究及非臨床研究考慮要點》一脈相承。


       要點中關于病毒載體生產規模的說明


      事實上,為了滿足臨床應用和商業生產需求,應用懸浮工藝借助生物反應器生產慢病毒載體已經成為一種趨勢。在近期發表的文獻中,有研究者對慢病毒載體穩產HEK293懸浮細胞系的進行了工藝開發和改進。從小規模到1~3L級生物反應器具有良好的重現性和穩定性。研究評價了兩種改善慢病毒載體總產量的方案,且這兩種方案均在灌流模式下采用了超聲波細胞過濾技術(3.5L生物反應器VS10L BioSep ,1L生物反應器VS miniBioSep ,Applikon)。總的來說,實現了總病毒滴度(TU/L每升培養液)超過1個對數的增加。尤其在灌流模式下可生產高達8 x 1010 TU / L的載體,且由于每天收獲,灌流模式的所得總載體(高達8×1010 TU / L)比批處理模式多11倍。預計所開發的生產工藝很適合大規模生產和商業化制造。

(了解文獻全部內容,可點擊閱讀原文)


      Applikon BioSep系統是一種獨特的用于高密度灌流過程的細胞截留裝置。它使用高頻共振超聲波來分離細胞,取代了傳統的篩網或濾膜裝置,具有傳統設備的所有優點,是一種無堵塞、無污染、低剪切力、無耗材的新型灌流系統。


特點:符合cGMP要求

         易于安裝和操作
         適用于任何品牌的生物反應器

         可長期連續培養(>90天)
         不易堵塞
         不損傷細胞
         高分離效率(>95%)


      BioSep可用于研發階段(1升/天),工藝開發階段(10-200升/天)和工業生產階段(1000升/天)。


         


Biosep工作原理



Biosep型號選擇


參考文獻:

Manceur AP, Kim H, Misic V, et,al.Scalable Lentiviral Vector Production Using Stable HEK293SF Producer Cell Lines.Hum Gene Ther Methods. 2017 Dec;28(6):330-339. doi: 10.1089/hgtb.2017.086. Epub 2017 Nov 21.


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